金衡灵为中药复方制剂，临床上常用于肿瘤患者的补充治疗及康复治疗，在抗病防病、调节机体免疫方面具有独特的作用。为评价中药金衡灵的安全性，笔者对该方剂进行了毒性试验研究，现报告如下。
材料和方法
一、实验材料
1. 受验样品：金衡灵，规格180 ml/瓶，批号20061201，人体推荐剂量为20 ml/d。提供棕黑液体（2倍浓缩液）30瓶作为本次实验的受试样品。样品常温保存。
2. 实验动物及饲养条件：选用上海西普尔-必凯实验动物有限公司繁殖的SPF级BI/F1代健康小鼠，生产许可证号SCXK（沪）2003-0002，合格证号0022027；上海斯莱克实验动物有限公司繁殖的清洁级SD健康大鼠，生产许可证号SCXK（沪）2003-0003，合格证号0021182。
实验动物在温度为18 ℃～22 ℃，相对湿度为40%～70%的南京医科大学卫生部抗体中心屏障系统中饲养。实验动物使用许可证号：SYXK（苏）2002-0014。辐照灭菌饲料由江苏省协同医药生物工程有限公司提供。
3. 主要试剂与仪器：T-1000型电子天平、JJ-100型电子天平、离心机、OLYMPUS显微镜、日本Hitachi 7020生化自动分析仪、Celly HY-318型血细胞自动分析仪。
二、实验方法
1. 小鼠经口急性毒性试验：用最大耐受量（MTD）法进行小鼠急性毒性试验，选用SPF级BI/F1代健康小鼠20只，雌、雄各10只，检疫3 d，体重为18.2～21.8 g。实验前动物禁食16 h，自由饮水。受试样品为2倍浓缩液，按最大灌胃容量0.96 g/kg体重一次性灌胃，受试样品急性毒性给予剂量为0.96 g/kg体重，相当于原液1.92 g/kg体重。连续观察14 d，记录中毒表现及死亡情况。
2. 反复给药毒性试验：选用清洁级SD健康大鼠80只，动物购买后，在本动物房内检疫室检疫3 d。金衡灵的人体推荐剂量为20 ml/d（以60 kg体重计），根据人体推荐摄入量的30、65和100倍设0.48，1.04，1.60 g/kg体重三个剂量组，另设一个阴性对照组，每组20只，雌、雄各半。受试样品为2倍浓缩液，用无菌水配制，低、中、高剂量配制浓度分别为25.0%、54.3%、83.3%。对照组用无菌水代替受试样品，按0.96 g/kg体重连续灌胃30 d。动物单笼饲养，自由进食饮水，每周称1次体重和2次食物摄入量，计算每周及总的食物利用率，每天观察动物一般情况、有无中毒表现和死亡。实验结束后观察：体重、食物利用率、血液学指标、各脏器绝对重量和相对重量（脏器重/体重）、各脏器病理学检查。
三、统计学处理
用SPSS 10.0软件对各实验原始数据进行方差齐性检验，满足方差齐性要求的数据用单因素方差分析方法对多个实验组分别与一个对照组进行组间均数的两两比较；对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态分布或方差齐后，用转换所得的数据进行统计处理。
结 果
一、小鼠经口急性毒性试验
实验观察期间，金衡灵对小鼠体重无影响。各组动物饮食和活动正常，生长良好，未见任何中毒表现，无死亡。因此，金衡灵的雌、雄性小鼠急性经口MTD＞1.92 g/kg体重，属无毒类。见表1。
表1 金衡灵对小鼠经口急性毒性试验结果
|
性别
|
只数
|
初始体重（g，
 ） |
终体重（g，
 ） |
剂量（g/kg体重）
|
死亡只数
|
MTD（g/kg体重）
|
|
雌
|
10
|
19.9±1.1
|
23.8±1.1a
|
1.92
|
0
|
＞1.92
|
|
雄
|
10
|
20.7±0.8
|
24.8±1.2a
|
1.92
|
0
|
＞1.92
|
注：与初始体重比较，aP>0.05
二、反复给药毒性试验
1. 金衡灵对大鼠体重的影响（表2）：各剂量组大鼠初始体重与对照组比较，差异均无统计学意义，即实验前大鼠的体重在各组间较为均衡。经口给予大鼠不同剂量的金衡灵30 d后，对各剂量组大鼠体重进行方差齐性检验，满足方差齐的要求，用相应的方法进行统计学处理。大鼠第30天体重各剂量组与对照组比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。
表2 金衡灵对各组大鼠体重的影响（g，
）
）|
剂量组（g/kg体重）
|
性别
|
只数
|
初始体重
|
第7天
|
第14天
|
第21天
|
第30天
|
|
0
|
雄
|
10
|
79±6
|
142±9
|
211±13
|
274±17
|
339±22
|
|
|
雌
|
10
|
78±4
|
133±7
|
174±9
|
204±9
|
232±11
|
|
0.48
|
雄
|
10
|
80±5a
|
142±5
|
211±11
|
281±16
|
344±21g
|
|
|
雌
|
10
|
78±5b
|
130±8
|
173±10
|
205±13
|
234±16h
|
|
1.04
|
雄
|
10
|
80±5c
|
141±6
|
207±6
|
272±9
|
335±15i
|
|
|
雌
|
10
|
78±4d
|
129±8
|
170±15
|
201±19
|
226±18j
|
|
1.60
|
雄
|
10
|
80±4e
|
142±8
|
211±9
|
273±14
|
339±16k
|
|
|
雌
|
10
|
78±4f
|
131±7
|
178±11
|
207±14
|
234±18l
|
注：与同性别0 g/kg体重组比较，初始时，aP＝0.991，bP＝1.000，cP＝0.995，dP＝1.000，eP＝0.991，fP＝0.999；第30天时，gP＝0.914，hP＝0.982，iP＝0.929，jP＝0.778，kP＝1.000，lP＝0.971
2. 金衡灵对大鼠食物利用率的影响：经口给予大鼠不同剂量的金衡灵30 d，各组大鼠增重见表3，摄食量见表4，食物利用率见表5。对大鼠总食物利用率进行方差齐性检验，满足方差齐性要求，用相应的方法进行统计学处理，各剂量组与对照组大鼠比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。
表3 金衡灵对各组大鼠增重的影响（g，
）
）|
剂量组（g/kg体重）
|
性别
|
只数
|
第1～7天
|
第8～14天
|
第15～21天
|
第22～30天
|
总增重
|
|
0
|
雄
|
10
|
62±4
|
69±7
|
63±6
|
66±8
|
260±18
|
|
|
雌
|
10
|
56±4
|
41±6
|
30±4
|
28±5
|
154±10
|
|
0.48
|
雄
|
10
|
62±4
|
69±8
|
69±7
|
63±9
|
264±23
|
|
|
雌
|
10
|
52±5
|
43±9
|
33±8
|
28±9
|
156±16
|
|
1.04
|
雄
|
10
|
62±3
|
66±5
|
65±8
|
63±14
|
256±15
|
|
|
雌
|
10
|
51±5
|
41±9
|
30±10
|
25±7
|
148±16
|
|
1.60
|
雄
|
10
|
62±4
|
69±3
|
62±10
|
66±7
|
260±14
|
|
|
雌
|
10
|
54±5
|
47±5
|
29±10
|
27±10
|
156±17
|
表4 金衡灵对各组大鼠摄食量的影响（g，
）
）|
剂量组（g/kg体重）
|
性别
|
只数
|
第1～7天
|
第8～14天
|
第15～21天
|
第22～30天
|
总摄食量
|
|
0
|
雄
|
10
|
122±6
|
189±9
|
224±8
|
275±14
|
810±25
|
|
|
雌
|
10
|
114±7
|
142±13
|
167±4
|
194±8
|
617±17
|
|
0.48
|
雄
|
10
|
118±6
|
189±12
|
225±19
|
270±22
|
802±57
|
|
|
雌
|
10
|
110±6
|
140±13
|
158±13
|
192±7
|
600±29
|
|
1.04
|
雄
|
10
|
118±6
|
178±4
|
214±18
|
252±9
|
762±26
|
|
|
雌
|
10
|
111±5
|
136±15
|
151±15
|
190±11
|
588±21
|
|
1.60
|
雄
|
10
|
117±3
|
187±3
|
214±17
|
259±9
|
777±22
|
|
|
雌
|
10
|
110±8
|
139±15
|
155±8
|
189±11
|
592±28
|
表5 金衡灵对各组大鼠食物利用率的影响（%，
）
）|
剂量组（g/kg体重）
|
性别
|
只数
|
第1～7天
|
第8～14天
|
第15～21天
|
第22～30天
|
总利用率
|
P值
|
|
0
|
雄
|
10
|
51.2±2.7
|
36.6±3.2
|
28.1±2.5
|
23.8±2.5
|
32.1±1.7
|
－
|
|
|
雌
|
10
|
48.8±5.2
|
28.7±2.3
|
18.1±2.3
|
14.2±2.7
|
24.9±1.4
|
－
|
|
0.48
|
雄
|
10
|
52.9±2.6
|
36.6±2.3
|
30.9±2.3
|
23.4±3.1
|
32.9±1.6
|
0.582
|
|
|
雌
|
10
|
47.8±3.3
|
30.8±6.1
|
20.5±4.6
|
14.6±4.3
|
26.0±2.0
|
0.505
|
|
1.04
|
雄
|
10
|
52.3±2.5
|
37.1±2.9
|
30.4±3.4
|
25.0±5.2
|
33.5±1.6
|
0.181
|
|
|
雌
|
10
|
46.3±3.5
|
30.3±4.7
|
19.8±4.9
|
13.3±3.4
|
25.2±2.0
|
0.981
|
|
1.60
|
雄
|
10
|
52.9±3.5
|
37.0±1.7
|
29.5±6.2
|
25.5±2.3
|
33.4±2.0
|
0.240
|
|
|
雌
|
10
|
49.1±4.5
|
34.0±3.9
|
18.7±6.7
|
14.2±5.0
|
26.4±2.5
|
0.261
|
注：P值是与同性别对照组大鼠比较所得
3. 金衡灵对大鼠血常规和白细胞分类的影响（表6）：经口给予大鼠不同剂量的金衡灵30 d，测定各剂量组大鼠血液红细胞计数、血红蛋白含量、白细胞计数及其分类等指标，与对照组比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。
表6 金衡灵对各组大鼠血常规和白细胞分类的影响
|
剂量组（g/kg体重）
|
性别
|
只数
|
白细胞计数
（×109/L）
|
红细胞计数
（×1012/L）
|
血红蛋白
（g/L）
|
中性粒细胞
（%）
|
|
||||
|
0
|
雄
|
10
|
10.3±2.9
|
7.2±0.3
|
153±6
|
12.0±4.3
|
|
||||
|
|
雌
|
10
|
5.6±2.1
|
7.1±0.3
|
146±7
|
10.9±5.6
|
|
||||
|
0.48
|
雄
|
10
|
8.9±2.1
|
7.1±0.3
|
149±5
|
11.1±4.5
|
|
||||
|
|
雌
|
10
|
6.3±2.4
|
7.4±0.4
|
151±6
|
7.0±3.3
|
|
||||
|
1.04
|
雄
|
10
|
8.2±2.8
|
7.2±0.4
|
149±5
|
10.7±4.4
|
|
||||
|
|
雌
|
10
|
4.1±1.6
|
6.8±0.4
|
144±6
|
7.7±3.0
|
|
||||
|
1.60
|
雄
|
10
|
10.7±2.6
|
7.1±0.2
|
150±5
|
13.4±6.7
|
|
||||
|
|
雌
|
10
|
4.9±1.3
|
7.1±0.4
|
149±5
|
7.2±3.1
|
|
||||
|
剂量组（g/kg体重）
|
性别
|
淋巴细胞（%）
|
单核细胞（%）
|
嗜碱粒细胞（%）
|
嗜酸粒细胞（%）
|
||||||
|
0
|
雄
|
73.1±9.0
|
6.8±4.4
|
7.5±5.2
|
0.6±0.3
|
||||||
|
|
雌
|
74.9±9.7
|
6.0±2.2
|
7.0±5.9
|
0.9±0.3
|
||||||
|
0.48
|
雄
|
72.3±13.1
|
5.7±5.1
|
10.2±8.0
|
0.6±0.3
|
||||||
|
|
雌
|
74.2±4.6
|
4.7±2.3
|
3.3±2.1
|
0.9±0.3
|
||||||
|
1.04
|
雄
|
77.0±8.2
|
5.0±3.2
|
6.7±4.9
|
0.6±0.1
|
||||||
|
|
雌
|
77.5±7.4
|
7.1±2.8
|
7.0±4.2
|
0.8±0.5
|
||||||
|
1.60
|
雄
|
76.0±9.8
|
3.5±2.3
|
6.6±4.7
|
0.6±0.4
|
||||||
|
|
雌
|
72.8±4.5
|
4.7±1.1
|
5.6±2.6
|
0.7±0.4
|
||||||
4. 血液生化指标（表7）：经口给予大鼠不同剂量的金衡灵30 d，测定各剂量组大鼠血清ALT、AST、总蛋白、白蛋白、总胆固醇、甘油三酯、尿素氮、肌酐及血糖的水平。雄性大鼠1.04 g/kg体重组、1.60 g/kg体重组总蛋白及1.60 g/kg体重组白蛋白显著高于对照组（均P＜0.05）；雌性大鼠0.48 g/kg体重组、1.60 g/kg体重组总蛋白及白蛋白均显著高于对照组（均P＜0.05）。但数值在本室质控正常范围内，故无实际临床意义。其他指标各剂量组与对照组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。
表7 金衡灵对各组大鼠部分血生化的影响
|
剂量组（g/kg体重）
|
性别
|
只数
|
ALT（U/L）
|
AST（U/L）
|
总蛋白（g/L）
|
白蛋白（g/L）
|
|
||||||
|
0
|
雄
|
10
|
51±8
|
96±22
|
61.2±2.7
|
34.2±2.5
|
|
||||||
|
|
雌
|
10
|
41±6
|
80±13
|
64.1±2.1
|
37.3±1.2
|
|
||||||
|
0.48
|
雄
|
10
|
53±11
|
93±17
|
63.4±2.0
|
35.7±1.1
|
|
||||||
|
|
雌
|
10
|
44±8
|
90±29
|
67.6±2.2a
|
38.9±1.0a
|
|
||||||
|
1.04
|
雄
|
10
|
50±10
|
101±16
|
64.5±3.2a
|
36.0±1.3
|
|
||||||
|
|
雌
|
10
|
41±7
|
83±10
|
66.0±2.2
|
38.3±1.3
|
|
||||||
|
1.60
|
雄
|
10
|
52±7
|
87±18
|
64.5±2.5a
|
36.2±1.2a
|
|
||||||
|
|
雌
|
10
|
43±10
|
86±12
|
67.3±3.8a
|
39.1±1.7a
|
|
||||||
|
剂量组（g/kg体重）
|
性别
|
只数
|
尿素氮
（mmol/L）
|
肌酐
（μmol/L）
|
总胆固醇
（mmol/L）
|
甘油三酯
（mmol/L）
|
血糖
（mmol/L）
|
||||||
|
0
|
雄
|
10
|
6.30±1.09
|
44±7
|
1.84±0.34
|
1.27±0.50
|
5.84±1.01
|
||||||
|
|
雌
|
10
|
7.69±1.24
|
42±3
|
2.26±0.39
|
0.62±0.15
|
6.17±0.63
|
||||||
|
0.48
|
雄
|
10
|
6.13±1.26
|
44±16
|
1.89±0.32
|
0.83±0.27
|
5.65±0.79
|
||||||
|
|
雌
|
10
|
7.16±1.06
|
44±3
|
2.49±0.47
|
0.55±0.15
|
5.40±0.45
|
||||||
|
1.04
|
雄
|
10
|
5.66±0.87
|
42±6
|
1.71±0.24
|
1.18±0.42
|
5.84±1.86
|
||||||
|
|
雌
|
10
|
7.96±1.27
|
45±4
|
2.49±0.23
|
0.64±0.18
|
6.78±1.91
|
||||||
|
1.60
|
雄
|
10
|
5.95±0.95
|
36±3
|
2.06±0.25
|
1.47±0.56
|
6.12±0.84
|
||||||
|
|
雌
|
10
|
8.19±1.48
|
43±4
|
2.44±0.27
|
0.63±0.22
|
5.99±1.50
|
||||||
注：与同性别对照组比较，aP＜0.05
5. 大体病理及组织学检查：（1）金衡灵对大鼠脏器绝对重量及相对重量的影响（表8）：经口给予大鼠不同剂量的金衡灵30 d，测定各组大鼠肝脏、肾脏、脾脏、性腺绝对重量及相对重量与对照组比较，差异无统计学意义（均P＞0.05）。（2）病理学检查：各组大鼠大体解剖均未见异常改变。镜检（高剂量组与对照组）可见肝脏：肝小叶结构清晰，肝细胞排列整齐，未见淤血和淤胆，对照组1只雌性鼠肝脏肝细胞水样变性；肾脏：肾皮质和髓质组织结构清楚，肾小管上皮细胞未见变性、坏死或炎性细胞反应；性腺：睾丸生精活跃，可见各级生精细胞及成熟精子，间质未见异常，卵巢发育良好，可见各级卵泡和成熟黄体；胃、十二指肠黏膜完好，未见黏膜上皮细胞坏死、脱落、溃疡或炎性细胞浸润；脾脏：白髓和红髓结构清楚，小体无明显萎缩，未见淋巴细胞增生和减少。故认为未见由该药物引起的肝、肾、脾、胃、十二指肠、睾丸、卵巢脏器毒性病理改变。
表8 金衡灵对各组大鼠脏器绝对重量及相对重量的影响
|
剂量组（g/kg体重）
|
性别
|
只数
|
肝重（g）
|
肝重/体重（%）
|
脾重（g）
|
脾重/体重（%）
|
|
|||
|
0
|
雄
|
10
|
12.98±1.44
|
3.83±0.42
|
0.83±0.11
|
0.25±0.03
|
|
|||
|
|
雌
|
10
|
9.37±0.77
|
4.06±0.36
|
0.53±0.04
|
0.23±0.02
|
|
|||
|
0.48
|
雄
|
10
|
13.65±2.10
|
3.96±0.44
|
0.86±0.12
|
0.25±0.03
|
|
|||
|
|
雌
|
10
|
8.93±0.77
|
3.82±0.19
|
0.57±0.10
|
0.24±0.03
|
|
|||
|
1.04
|
雄
|
10
|
13.22±1.27
|
3.95±0.36
|
0.87±0.17
|
0.26±0.04
|
|
|||
|
|
雌
|
10
|
8.71±1.15
|
3.85±0.37
|
0.53±0.06
|
0.23±0.03
|
|
|||
|
1.60
|
雄
|
10
|
12.87±1.11
|
3.79±0.29
|
0.85±0.12
|
0.25±0.03
|
|
|||
|
|
雌
|
10
|
8.82±0.92
|
3.77±0.26
|
0.58±0.06
|
0.25±0.03
|
|
|||
|
剂量组（g/kg体重）
|
性别
|
肾重（g）
|
肾重/体重（%）
|
性腺重（g）
|
性腺重/体重（%）
|
|||||
|
0
|
雄
|
2.95±0.24
|
0.87±0.10
|
2.98±0.13
|
0.88±0.07
|
|||||
|
|
雌
|
1.95±0.10
|
0.84±0.04
|
0.14±0.02
|
0.06±0.01
|
|||||
|
0.48
|
雄
|
3.10±0.32
|
0.90±0.06
|
3.06±0.21
|
0.89±0.06
|
|||||
|
|
雌
|
1.83±0.13
|
0.78±0.04
|
0.14±0.03
|
0.06±0.02
|
|||||
|
1.04
|
雄
|
2.93±0.20
|
0.87±0.07
|
3.05±0.19
|
0.91±0.06
|
|||||
|
|
雌
|
1.86±0.13
|
0.82±0.05
|
0.13±0.01
|
0.06±0.01
|
|||||
|
1.60
|
雄
|
2.99±0.17
|
0.88±0.02
|
3.03±0.29
|
0.89±0.06
|
|||||
|
|
雌
|
1.95±0.25
|
0.83±0.10
|
0.14±0.02
|
0.06±0.01
|
|||||
讨 论
中药复方金衡灵是由黄芪、当归、枸杞子等组成的纯中药复方合剂，处方中各药材均是广泛使用的传统中药，符合国家法定标准，无毒性药材，无十八反、十九畏等配伍禁忌[1]。以往的动物实验已证明金衡灵（金衡灵的前身为免疫平衡调理剂）可以有效调节机体的免疫平衡，增强小鼠抗疲劳和耐缺氧的能力[2]。本次研究主要评价金衡灵的安全性。
急性毒性试验受药物浓度和小鼠胃容积限制，本实验难以求得半数致死量（LD50），而药理学通常用药物5%的致死量（LD5）与95%有效量（ED95）之间距离来衡量药物的安全性[3]。本急性毒性试验以最大浓度和最大容积点金衡灵液灌胃小鼠，连续观察14 d，无一例中毒及死亡。成人每日用量为20 ml，按体重50 kg计算，即0.02 g/kg体重，由此测得小鼠的药量相当于成人用量的100倍。本药以MTD给药，难以出现中毒情况，说明其安全系数较高。
反复给药毒性试验：喂养30 d显示，金衡灵对大鼠饮食、排泄、精神状态、行为活动无影响，体重也随天数增加而增加，说明该药对大鼠生长发育无抵制作用。脏器重量及相对重量下降意味着该器官萎缩、退行性变或功能减弱；脏器重量及相对重量增加，可能是该器官充血、水肿、增生性肥大或功能加强[4]。本实验中各组肝脏、肾脏、睾丸、卵巢、脾脏重量及相对重量与对照组比较差异无统计学意义。高剂量组与对照组的肝脏、肾脏、睾丸、卵巢、脾脏外观色泽及质地正常，HE染色未发现有因药物而导致的病理改变，故认为中药金衡灵对脏器无明显伤害。
查红细胞计数、血红蛋白含量、白细胞计数及其分类可以确定有无贫血及感染的情况，本实验结果与对照组比较无差异，说明该药对机体血液学指标无影响。ALT、AST是人体各种脏器及组织如心脏、肝脏、肌肉等细胞内的重要酶，参与体内重要氨基酸的合成。血清ALT代表肝脏功能，总蛋白、白蛋白代表蛋白质合成的稳定性。甘油三酯在肝脏、脂肪组织、小肠黏膜上皮细胞合成，是所有脂蛋白中的甘油三酯总和。尿素氮、肌酐验证金衡灵是否对肾脏存在影响。虽本实验总蛋白及白蛋白比对照组高，但均在正常范围。
中药金衡灵急性毒性试验未见小鼠药物性死亡；30 d喂养实验对大鼠生长发育无抑制作用，未发现对血液学、血液生化各指标及重要脏器组织因药物引起的毒性影响，说明该药安全性较好。
参考文献
[1] 孔祥军. 中药合理应用初探. 现代中西医结合杂志，2009，18（2）：166.[2] 王祝鸣，李芸茜. 免疫平衡调理剂抗疲劳的实验研究. 南京医科大学学报，2001，21（4）：325－327.
[3] 倪莉. 基于机体状态的中药毒性理论研究. 中华中医药杂志，2009，5（2）：187.
[4] 马秀兰，宋淑云，叶建新，等. 对成年大鼠脏器系统与体重相关性的探讨. 山西医药杂志，2005，34（8）：661－662.
(编辑：吴莹 收稿日期：2009-11-13)